杆立泰防治大肠杆菌的应用试验效果

试验地点：临沂市莒南县文瞳镇某一养殖场做为实验鸡场
　　随机选择五个鸡棚为实验单位分别标号1、2、3、4、5号棚，在棚内随机各选一只鸡为分别标1、2、3、4、5号。
　　取号1棚舍的1号病鸡未使产品前粪便溶解样划线培养，在鉴别培养基上取大肠杆菌菌样在琼脂培养基上进行穿刺培养，结果如图：

      1号棚舍1号病鸡使用产品三天后，取粪便溶解样划线培养，在鉴别培养基上取大肠杆菌菌样在琼脂培养基上进行穿刺培养，结果如图：

      因为2、3、4、5号棚的2、3、4、5号鸡与以上实验结果一样，所以就不一一赘述。

杆立泰对大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌体外拮抗试验

摘要：菌种为黑龙江省微生物研究所与俄罗斯国家科学院微生物研究所引进的耐酸乳酸菌，产品是由哈尔滨中科生物工程所生产的乳酸菌菌中药发酵制剂-杆立泰，体外观察对大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌的抑制效果；同时给1 日龄健康罗曼商品代雏鸡服用杆立泰，然后人工感染大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌，观察保护率。结果表明，杆立泰对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌率分别为98.28%和95.91%；对人工感染大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌的保护率分别为90%和83.3%。
　　关键词  杆立泰、大肠杆菌、沙门氏菌、抑菌率、 保护率。
　　大肠杆菌和沙门氏菌导致的消化道疾病对养禽业危害严重，由于这两种菌的血清型众多，给疫苗防治带来了困难，抗生素滥用又引起耐药菌株的不断增加，肠道菌群的失调，给治疗带来了更大的困难，同时还造成药物的残留危害人类健康。乳酸菌是动物消化道中的优势菌群，产生的有机酸（如乳酸、丁酸、醋酸等）、双乙酰、过氧化氢、细菌代谢产物等化合物对导致消化道疾病的腐败菌和病原菌具有抑制作用，而成为动物微生态制剂的主要组成菌种。该试验利用哈尔滨中科生物工程有限公司生产的乳酸杆菌和芽孢杆菌制备的活菌中药微生态制剂对鸡白痢沙门氏菌和致病性大肠杆菌在体外进行攻击，观察其抑制效果；同时人工感染大肠杆菌和沙门氏菌观察杆立泰对鸡的保护效果。

1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验菌株鸡白痢沙门氏菌（C79-13）和大肠杆菌O78 由哈兽研微生物与免疫学实验室惠赠；杆立泰由哈尔滨中科生物工程有限公司生产。
1.1.2 实验动物 1日龄健康罗曼商品代雏鸡购于临沂种鸡场。
1.1.3 培养基MRS（Manna,Rogosa,Shape）肉汤培养基的配置分别称取胰蛋白胨5 g，牛肉浸膏10g，酵母浸膏5 g，葡萄糖10 g，柠檬酸三铵1 g，醋酸钠2.5 g，硫酸镁0.05 g，硫酸锰0.025 g，磷酸氢二钠1 g，吐温-80 0.5 g，用蒸馏水定ml。用1 mol/L 的NaOH 和Hcl 调节至pH=7 左右，分装，121℃灭菌15 min。营养琼脂、大肠埃希菌选择培养基（麦康凯培养基）、营养肉汤购自杭州微生物试剂公司。
1.2 方法
1.2.1杆立泰的制备。
1.2.2 抑菌试验大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌分别接入营养肉汤和四硫磺酸钠肉汤活化培养，将菌液浓度调配成108 个/ml，分别取菌浓度为0.5%的杆立泰溶液、大肠杆菌和沙门氏菌1 ml 与20 ml 的MRS 培养液混合，37℃烛缸中培养48 h，用无菌生理盐水作梯度稀释后，涂布在营养琼脂和各种选择性培养基上，经培养至菌落出现，计数各菌菌落数，同时分别大肠杆菌和沙门氏菌1 ml 与20 ml 的MRS 培养液作阳性对照，以灭菌生理盐水阴性对照。计菌落数，计算出对鸡白痢沙门氏菌和大肠杆菌的抑制率。
　　抑制率=（致病菌阳性对照生长菌落数-混合菌生长菌落数）/致病菌阳性对照生长菌落数&tiMES;100%
 1.3 杆立泰对人工感染大肠杆菌、沙门氏菌雏鸡的预防试验
1 日龄罗曼商品代雏鸡120 只（均为健雏，经粪便检查无大肠杆菌）公母各半，随机分成4 组，每组30 只，分别标记为A、B、C、D 组，分笼饲养；A、B 组从1 日龄起按每只每天0.5 ml 的量在饮水中加入杆立泰，C、D 组鸡分别以灭菌生理盐水替代；4 日龄时，A、C 组鸡每只灌服4×108个菌的沙门氏菌菌液，B、D 组鸡每只灌服4&tiMES;108个菌的鸡大肠杆菌菌液，每天1 次，连攻2 d，攻毒后每天观察，记录每组鸡的发病和死亡情况。1周后，试验组A、B 组饮水中杆立泰调整到每只每天1 ml，同样要求3 h 饮完，试验期为30 d。

2 结果：
2.1 杆立泰培养物体外对大肠杆菌和沙门氏菌的拮抗试验结果（表1）
 

2.2 杆立泰对人工感染大肠杆菌和沙门氏菌的预防试验结果（表2）
表2  杆痢肽对人工感染大肠杆菌和沙门氏菌的预防试验结果

3 讨论：
　　大肠杆菌病和鸡白痢病是常见的鸡消化道传染病，目前此病在各种类型的养鸡场均有不同程度的发生，对于禽类消化道疾病的治疗仍以抗生素为主，但若抗生素使用不当，不仅达不到治疗效果，反而导致体内正常菌群失调或耐药菌株的产生，近年来，活菌中药微生态制剂的深入研究与应用，颇受人们的重视。本研究就以杆立泰对大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌抑制作用等方面进行了深讨，研究结果表明，由哈尔滨中科生物工程有限公司生产的复合菌中药发酵制剂-杆立泰，对大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌有明显的抑制作用，抑制率分别达到95%以上；人工感染大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌的预防试验表明，使用乳酸杆菌和芽孢杆菌组成的杆痢肽能够抵抗大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌的感染，维护鸡体的微生态平衡，其保护率分别达到80%以上。该菌剂便于口服进入肠道，可用于防治鸡大肠杆菌和鸡白痢沙门氏菌病，本实验为开发拮抗作用强，调整菌群失调作用好，兼有提高机体免疫力的多功能微生态制剂提供了一定的依据。