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免疫层析法(immunochromatographic assay),是一种侧向横流形式的免疫实验(lateral flow immunodiagnostic test) 。
层析法检测试剂的组成成份可分为三个部分,其一是多孔材料,包括样品垫、吸水垫、结合垫及硝酸纤维膜;其二是试剂,如抗体、金标结合物等;其三是层压结构及卡盒,如PVC板、双面胶、盒等(见表1及图1)。
图层析法免疫胶体金检测试剂的组成成分
类别 | 名称 |
多孔材料 | 硝酸纤维膜 |
样品垫 | |
金标结合垫 | |
吸水垫 | |
试剂 | 捕获抗体 |
结合蛋白 | |
封闭剂 | |
表面活性剂 | |
胶体金颗粒 | |
缓冲液等 | |
层压结构 | 背衬板如PVC板 |
双面胶带 | |
试剂盒(卡) |
层析法免疫胶体金检测试剂的测试原理
层析法免疫胶体金检测试剂实际上是免疫金标记技术和抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式,相比ELISA试剂,除标记物不同外,同样服从于抗原抗体反应的特性。此种检测方法具有明显的优点:
·方便使用,体现在操作简单,不需经过特殊培训。
·短时间获得检测结果,一般10-15分钟即可得出结论。
·不同环境下的稳定性好,不需冷藏。
·相比而言,其生产成本和检测成本均较低。
·检测标本种类多:可用于查血、尿液或粪便,因而适合各种检查
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面,并取得了要喜的进展,解决了一些过去未能解决的问题,80年代以来似有取代免疫电镜PAP技术的趋势。胶体金标记抗体技术在电镜水平应用有许多优点:首先,手续不如PAP法烦琐,不需用H2O2等损伤微细结构的处理步骤,对微细结构的影响较少。其次,金颗粒具有很高的电子密度,在电镜下金颗粒清晰可辨,易于与其他免疫产物相区别。因此,金标法还可以和PAP法相结合进行双重或多重染色的超微结构定位。另外,利用不同直径的金颗粒标记不同的抗体,是研究突触小泡内神经递质共存的有力工具。由于抗原抗体反应部位结合金颗粒数量的多少可进行粗略的免疫细胞化学定量研究。金标抗体还可加入培养液中,对培养细胞内抗原进行标记定位。曾有报告用金标记法于细胞内骨架的研究获满意的效果。由于金具有强烈的继发电子的能力,因此,不仅可以用于透射电镜的超薄切片观察,也可以用于扫描电镜对细胞表面的抗原、受体进行标记定位观察。金标液无毒性。
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