概述。 
1 免疫球蛋白的性质 
免疫球蛋白具有所有蛋白质的通性，它的活性受到热、酸、碱等的影响。因此，在分离制备时，应保障其在分离制备条件下的稳定性。其粗品的免疫活力一般在低于57℃时，几乎没有变化，但从57℃开始降低，将近80℃时基本失活；过酸或过碱都会造成免疫球蛋白变性失活。杨严峻等（1996）研究发现，免疫球蛋白的耐热性与其纯度有关，纯度越高，其耐热性就越差。因此在分离制备Ig时不仅要考虑温度对Ig活力的影响，纯度也是要重点考虑的因素，而且对纯度的要求也越来越高。 
2 免疫球蛋白的提取 
2.1 血液中免疫球蛋白的提取 
根据蛋白质的分子大小、电荷多少、溶解度以及免疫学特征等，从血液中提取免疫球蛋白归纳起来主要有盐析法（如多聚磷酸钠絮凝法、硫酸铵盐析法)、有机溶剂沉淀法(如冷乙醇分离法)、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法等。用于大规模生产的方法主要有：冷乙醇分离法、盐析法、利凡诺法和柱层析法等，应用较多的有硫酸铵盐析法和冷乙醇分离法。 
2.1.1 盐析法 
用于盐析法的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁、氯化钠等，其中以硫酸铵最为常用。因为硫酸铵在水中的溶解度很大，有利于达到高离子强度，且受温度影响小，一般不会引起蛋白质变性，所以常用来盐析免疫球蛋白（McCormack W T等，1993）。盐析法是利用不同的蛋白对盐浓度敏感程度的差异性进行的。王三虎等（1998）采用硫酸铵盐析法从猪血中提取免疫球蛋白，其提取工艺为：新鲜猪血→猪血浆→20%饱和硫酸铵沉淀→上清液→50%饱和硫酸铵→免疫球蛋白粗品。 
另外，影响盐析的因素有：（1）pH值当溶液的pH值与免疫球蛋白等电点pI相等时，沉淀效果最好，另外，硫酸铵在水中呈酸性，为防止其对蛋白质的破坏，应用氨水调pH至中性。（2）温度温度超过57℃，免疫球蛋白的免疫活力大大降低。（3）静置沉降时间随着血样量增加，所需静置沉降的时间越长提取效果越好。 
2.1.2 有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法广泛用于生产蛋白质制剂，常用的试剂是丙酮和乙醇等，其中以乙醇最为常用。冷乙醇分离法提取免疫球蛋白最早是由Cohn等（1992）提出的，用于制备丙种球蛋白(IgG)。目前，国际上常用冷乙醇法有两种，一种是美国等主要使用的Cohn-Oncley法，另一种是西欧等国主要使用Kistler和Nitschmann法。冷乙醇分离法是中国生物制品规程推荐用的方法，不仅分离物质多，可同时分离多种血浆成分，分辨率高，提纯效果好，而且有抑菌、清除和灭活病毒的作用，但需要在低温条件下操作。工艺流程：血清→用水稀释4倍→25℃下调节pH至7.7→置冰盐水中冷却至有小冰生成→慢慢加入50%的乙醇，并搅拌使乙醇最终浓度为20%→5℃～7℃离心分离→取沉淀加水溶解→免疫球蛋白的粗提液。 
2.2 初乳中免疫球蛋白的提取 
初乳中免疫球蛋白的分离方法主要有超滤法、色谱分离法、等电点分子筛过滤法等。但从工业化生产、产品得率、工艺条件等方面考虑，常用的是超滤法。其分离过程如下：初乳→离心去脂→63℃，30min杀菌→35℃下添加凝乳酶凝乳→离心→初乳乳清→超滤→浓缩(浓缩4.5倍)→冷冻干燥。 
2.3 蛋黄中免疫球蛋白的提取 
目前从蛋黄中提取免疫球蛋白所遇到的主要困难是去除所含的高浓度的类脂，通常用水或缓冲液稀释使蛋白质与类脂分离。近年来发展起来的并经研究可行的提取方法有水稀释法、聚乙二醇法、海藻酸钠法及葡萄糖硫酸盐法等（钟青萍等，1998）。常用的水稀释法工艺流程如下：新鲜鸡蛋→蛋黄→加水稀释、搅拌、静置沉淀→抽提液→加絮凝剂→絮凝清液即免疫球蛋白粗提液。 
3 免疫球蛋白的纯化 
提纯免疫球蛋白的方法很多，常见的有离子交换法、凝胶过滤法和亲和层析法等。离子交换法是根据分子电荷密度来分离纯化免疫球蛋白，常用DEAE-cellulose和DEAE-Sephadex柱。蛋白质在溶液离子强度较低时可与离子交换介质中带相反电荷的极性基团结合，当pH或离子强度改变时，又可被同电性的离子竞争置换解脱。离子交换层析就是根据电荷性的差异进行分子的分离，它使带电荷的蛋白质结合在带异种电荷的基质上，通过改变洗脱液的盐浓度或pH值来改变蛋白质与基质之间的结合程度，结果使不同类的蛋白质被分别洗脱下来。离子交换层析是一种成熟的技术，它的重现性好，简单易行，具有分辨率高、容量大、收获率高的优点，而且具有浓缩效应，通常作为多步层析中的第一步（李长彪等，2005）。不同的抗体具有不同的等电点，即使是同一亚类的免疫球蛋白也会有相当大的差异，因此，并没有一个通用的程序进行离子交换层析。 
凝胶过滤法是基于免疫球蛋白相对分子质量大于其它蛋白质来分离的，SephadexG100-200。凝胶过滤是一种温和的纯化方法，对样品分子的活性没有影响，它是根据样品中物质分子大小不同，在通过多孔凝胶介质时达到分离目的。分子小的能进胶，路程长，后流出；分子大的不能进胶，路程短，先流出。对IgG类的抗体来说，凝胶过滤常用来去除电荷性与单克隆抗体相同的杂质，如转铁蛋白等。凝胶过滤可以用来去除去纯化材料的双体、四聚体和多聚体，也可以用于纯化方案的最后一步，用于最终产品储存前的脱盐缓冲转换。不同凝胶介质的分离范围是不同的，应选择分离抗体分子大小范围内的相应凝胶介质。另外，粗颗粒的凝胶介质速度快，细颗粒的凝胶介质分辨率高。凝胶过滤对层析柱有要求，理想的层析柱的直径与长度之比是1：25～100（齐顺章，1986）。当用同样直径的层析柱分离2种以上的物质时，长层析柱比短的分辨率高；当用同样长度的层析柱分离2种以上的物质时，长层析柱比短的分辨率高；当用同样长度的层析柱分离2种以上的物质时，层析柱直径大的比小的分辨率高。 
亲和层析法是依生物高分子所特有的生物活性进行分离，提纯和浓缩的特异性吸附层析技术，是一种有效的分离方法，常用琼脂糖亲和层析法。亲和层析具有高效、快速、纯化结果好的优点，但它有以下几个缺点：需要高纯度的亲和偶联配体；洗脱液可能损害目的蛋白活性，配体可能从柱子上脱落下来；成本高费用大（张龙翔等，1982）。常用的配体有3类：A蛋白、G蛋白、抗原或特异性抗单克隆体。